La Real Time PCR, denominata anche PCR quantitativa, è una tecnica impiegata in biologia molecolare per amplificare e quantificare simultaneamente il DNA: essa misura l'amplificazione in tempo reale durante la fase esponenziale della PCR, quando cioè l'efficienza della reazione è influenzata minimamente dalle variabili del processo. I prodotti della reazione vengono determinati a partire dal momento in cui l’amplificato diventa rilevabile.

Questa tecnica in ambito oncologico permette l’analisi di DNA estratto da tessuti freschi, congelati, fissati in formalina inclusi in paraffina (FFPE) e plasma e l'identificazione di mutazioni ricorrenti tramite l'amplificazione specifica dell'allele mutato.